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　　在寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑中添加CBD油，可以有效改善寵物從焦慮到腫瘤的各種疾病。我們使用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)對實(shí)際的CBD油寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品進(jìn)行了非靶向分析，以篩查產(chǎn)品中真菌毒素的存在。

　　實(shí)    驗(yàn)

　　1. 儀器與材料

　　含CBD油的寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品用二氯甲烷稀釋500倍。然后將50微升稀釋后的樣品加入950微升甲醇中。在Agilent 1260 Prime / 6125 LC/MS XT系統(tǒng)上進(jìn)行分析，色譜柱為Poroshell C18（2.1 mm x 100 mm, 1.9μm)，流動相A為0.1% (v/v)甲酸-水溶液，流動相B為0.1% (v/v)甲酸-甲醇溶液。流動相梯度變化為72% A ~ 95% A，運(yùn)行時間為15分鐘，后運(yùn)行時間為2分鐘。

質(zhì)譜數(shù)據(jù)校正

圖1為五種真菌毒素的大麻籽油加標(biāo)樣品的TIC圖。

圖1：五種真菌毒素的大麻籽油加標(biāo)樣品在MassWorks

　　軟件中，黃曲霉毒素B2作為質(zhì)譜校正標(biāo)樣，將單四極桿LC/MS數(shù)據(jù)校正為精確質(zhì)量數(shù)據(jù)，校正的質(zhì)量誤差小于1mDa，譜圖準(zhǔn)確度（Spectral Accuracy）優(yōu)于99%，見圖2。

圖2：MassWorks質(zhì)譜校正結(jié)果。

　　為了驗(yàn)證該方法對精確質(zhì)量測量的準(zhǔn)確度和對未知真菌毒素的鑒定能力，我們在MassWorks將該校正應(yīng)用于五種真菌毒素，即可得到它們的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)，并以±20mDa質(zhì)量誤差窗口和C/H/N/O/Cl作為可能的元素，使用CLIPS功能對它們進(jìn)行分子式分析，得到分子式的譜圖準(zhǔn)確度結(jié)果，見圖3。

圖3：五種真菌毒素的精確質(zhì)量和分子式譜圖準(zhǔn)確度結(jié)果

從圖3的結(jié)果可以看出，結(jié)合MassWorks的精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度，我們可以對5種真菌毒素中的4種進(jìn)行可靠的鑒定。例如，黃曲霉毒素G2，測定的質(zhì)量誤差僅為0.5 mDa，分子式的譜圖準(zhǔn)確度為98.1%，排在全部89個候選分子式的第一位，說明了MassWorks對它實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確的鑒別。而赭曲霉毒素A由于其極低的信號響應(yīng)和質(zhì)譜干擾，降低了其鑒別結(jié)果的置信度，它的譜圖準(zhǔn)確度僅為86.0%。

圖4：黃曲霉毒素G2的鑒定結(jié)果表明，排序第一的分子式譜圖準(zhǔn)確為98.1%，理論同位素和校正同位素完美匹配

　　3. 樣品分析結(jié)果及討論

當(dāng)我們將校正應(yīng)用于大麻籽油樣品TIC圖中的主峰時，我們發(fā)現(xiàn)用C/H/N/O/Cl元素進(jìn)行的CLIPS檢索鑒定不能解釋A+2信號，只有添加S元素后才能對其進(jìn)行高譜圖準(zhǔn)確度的鑒定，這也表明了該化合物肯定含S元素，分析結(jié)果見圖5。

　　圖5：大麻籽油TIC主峰的分析結(jié)果表明，該物質(zhì)的分子式為C16H27N3S，精確質(zhì)量誤差為14.4mDa，譜圖準(zhǔn)確度為98.98%

對寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品#1，我們想知道MassWorks的精確質(zhì)量校正方法是否能夠區(qū)分CBD化合物和5種真菌毒素之一的黃曲霉毒素B2，因?yàn)閮烧叩恼麛?shù)質(zhì)量均在m/z 315處。圖6下方的XIC圖表明了m/z 315主要在10min后出峰，我們將對這幾個峰進(jìn)行MassWorks軟件的CLIPS分析。

圖6：寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品#1的TIC圖和m/z 315的XIT圖

Rt=10.25min峰的精確質(zhì)量測定結(jié)果為m/z 315.2312，質(zhì)量誤差小于1mDa，排序第一的分子式C21H30O2的譜圖準(zhǔn)確度為98.2%（見圖7），結(jié)果表明該物質(zhì)為CBD化合物。盡管它的整數(shù)質(zhì)量與黃曲霉毒素B2一樣，但是精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度告訴我們，我們可以正確地區(qū)別和鑒定它們。

圖7：CBD化合物的鑒定結(jié)果

通過CLIPS分析還正確地確認(rèn)了在10.5min峰位置中發(fā)現(xiàn)的CBD同分異構(gòu)體，質(zhì)量誤差為-10mDa，譜圖準(zhǔn)確度為94.8%，見圖8。

圖8：CBD的同分異構(gòu)體的鑒定結(jié)果

　　10.65min峰的CLIPS未知元素組成分析表明，它不屬于CBD類，也與黃曲霉毒素B2完全不同。

圖9：10.65min峰的分子式結(jié)果為C23H24O，譜圖準(zhǔn)確度為98.37%

最后一個11min峰的結(jié)果表明，它是另一種類型的CBD化合物，其質(zhì)量精度為7mDa，光譜精度為98.9%。

圖10：11min峰的分子式結(jié)果為C21H32O3，譜圖準(zhǔn)確度為98.87%

 結(jié)論

1）單四極桿LC/MS系統(tǒng)可以獲得精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度，這可以幫助我們?nèi)ミM(jìn)行未知物的鑒定，是一種有用且經(jīng)濟(jì)的寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑分析工具，可用于活性CBD化合物或可能的真菌毒素污染物的篩查。

2）盡管一些化合物有相同的整數(shù)m/z，但MassWorks的精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度能對他們進(jìn)行鑒定和區(qū)分，如本文中的CBD和黃曲霉毒素B2(整數(shù)質(zhì)量都在m/z 315處)。

關(guān)于MassWorks

　　軟件MassWorks軟件是由 Cerno Bioscience 公司開發(fā)的一款革命性的MS數(shù)據(jù)定性分析軟件，能幫助我們在低分辨率的四極桿GC/MS、LC/MS直接測定化合物的精確質(zhì)量，并通過獨(dú)有的譜圖準(zhǔn)確度概念確定出準(zhǔn)確的分子式。MassWorks軟件同樣適用于高分率質(zhì)譜（TOF、Orbitrap）的定性分析。

關(guān)于綠綿科技

綠綿科技是Cerno Bioscience公司在中國區(qū)的總代理商，負(fù)責(zé)Cerno公司旗下的MassWorks、GC/ID 等產(chǎn)品市場推廣、銷售、售前/售后技術(shù)支持、應(yīng)用支持。若您想了解獲取 MassWorks 產(chǎn)品的更多信息或應(yīng)用，歡迎致電綠綿科技！